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總巰基測(cè)定試劑盒說(shuō)明書

發(fā)布時(shí)間:2023/3/10      點(diǎn)擊次數(shù):1158

總巰基測(cè)定試劑盒說(shuō)明書

分光光度法  50 管/24 樣注意:正式測(cè)定之前選擇 2-3 個(gè)預(yù)期差異大的樣本做預(yù)測(cè)定。

測(cè)定意義

生物體內(nèi)巰基主要包括谷胱甘肽巰基和蛋白質(zhì)巰基。前者不僅能夠修復(fù)氧化損傷的蛋白質(zhì), 而且參與活性氧清除,后者對(duì)于維持蛋白質(zhì)構(gòu)象具有重要作用。通過(guò)測(cè)定總巰基含量和 GSH 含量,能夠間接測(cè)定蛋白質(zhì)巰基含量。

測(cè)定原理

巰基基團(tuán)與 5,5’- 二硫代-雙-硝基苯甲酸(DTNB)反應(yīng),生成黃色化合物,在 412nm 處有最大吸收峰。

自備實(shí)驗(yàn)用品

天平、研缽、可見分光光度計(jì)、恒溫水浴鍋、1mL 玻璃比色皿和蒸餾水。

試劑組成和配制

提取液:液體 50 mL×1 瓶,4℃保存。試劑一:液體 40 mL×1 瓶,4℃保存。

試劑二:液體 3 mL×1 瓶,4℃避光保存。

樣品的制備

(1)   動(dòng)物、植物組織:按照組織質(zhì)量(g):提取液體積(mL)為 1:5~10 的比例(建議稱取約 0.1g 組織,加入 1mL 提取液)進(jìn)行冰浴勻漿,然后 8000g,4℃離心 10min, 取上清,置冰上待測(cè)。

(2)   血清,培養(yǎng)液:直接測(cè)定。

操作步驟


對(duì)照管

測(cè)定管

樣品(μL)

200

200

試劑一(μL)

750

750

試劑二(μL)


50

H2O(μL)

50


混勻,25℃靜置 10min, 1cm 光徑玻璃比色皿,雙蒸水調(diào)零,測(cè)定   412nm 吸光值,ΔA=A 測(cè)定-A對(duì)照。



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